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 RNA水平检测

(一)转录组
 
    转录组在广义上指某一生理条件下,细胞内所有转录产物的集合,包括信使RNA、核糖体RNA、转运RNA及非编码RNA;在狭义上是指所有mRNA的集合。
1. 检测方法
Ø 转录组测序
转录组测序是基因结构和功能研究的基础。针对不同种类的RNA,可采用不同的方法进行分离和富集,然后进行测序。mRNA与lncRNA见图8
 
8. 转录组样品制备与测序流程
 
 
2. 应用领域
Ø 疾病分型研究;
Ø 分子标志和药物靶点的筛选;
Ø 药理与病理学研究;
Ø 功能基因组筛选;
Ø 生物代谢调控研究
3. 我们的优势
Ø 重复性好;
Ø 数字信号;
Ø 检测精度高,从几个到几十万个拷贝;
Ø 分辨率高,可以检测单个碱基差异。
 
(二)小RNA 
 
RNA是生物体内一类重要的特殊分子,以RNA干扰、翻译抑制、异染色质形成等基因沉默方式调控生长发育、应激反应等多种多样的细胞进程。许多疾病的发生、发展都与小RNA的调控密切相关。
1. 检测方法
Ø RNA测序
二代测序省去了小RNA克隆文库的构建过程,可以一次性产生上百万条小RNA序列,能够快速鉴定特定条件下表达的已知小RNA并发现新的小RNA,同时还可以研究不同条件下小RNA的表达差异。
Ø 微小RNA(microRNA,miRNA) 芯片
miRNA芯片的检测原理是:用Cy-3对总RNA样品进行标记,然后与miRNA芯片杂交,通过扫描芯片上绿光信号的强度,计算出该样品中miRNA的表达量,从而了解该样品中哪些miRNA的表达量出现了异常。原理图见图9,测序流程见图10。
 
9. miRNA的检测原理
 
 
10. miRNA测序流程
 
 
2. 应用领域
Ø 疾病致病机制研究;
Ø 靶基因功能研究;
Ø 肿瘤研究;
Ø 药物药理研究;
Ø 生物标志物筛选;
Ø 发育进化研究。
3. 我们的优势
Ø 高通量:一次测序得到的序列可以达到千万左右;
Ø 可拓展性:可以鉴定未知新小 RNA;
Ø 重复性良好:深度测序保证了检测的随机性,重复性好;
Ø 高分辨率:可以检测到单个碱基差异。
 
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